Tóm tắt Luận văn Nghiên cứu chiết tách và định danh một số phytoncid chủ yếu từ củ nén ở Quảng Nam
1
2
Bꢀ GIÁO DꢁC VÀ ĐÀO TꢂO
ĐꢂI HꢃC ĐÀ NꢄNG
Công trình ñưꢀc hoàn thành tꢁi
ĐꢂI HꢃC ĐÀ NꢄNG
TRꢅN THꢆ NGꢃC THANH
Ngưꢂi hưꢃng dꢄn khoa hꢅc: PGS.TS. LÊ THꢆ LIÊN THANH
Phꢆn biꢇn 1: PGS.TS. LÊ Tꢓ HꢍI
NGHIÊN CꢇU CHIꢈT TÁCH VÀ ĐꢆNH DANH
MꢀT Sꢉ PHYTONCID CHꢊ YꢈU Tꢋ Cꢊ NÉN
ꢌ QUꢍNG NAM
Phꢆn biꢇn 2: TS. NGUYꢔN THꢆ BÍCH TUYꢈT
Chuyên ngành : Hoá hꢎu cơ
Mã sꢏ
:
60 44 27
Luꢈn văn ñưꢀc bꢆo vꢇ tꢁi Hꢉi ñꢊng chꢋm Luꢈn văn tꢌt nghiꢇp thꢁc
sĩ khoa hꢅc hꢅp tꢁi Đꢁi hꢅc Đà Nꢍng vào ngày 30 tháng 11 năm
2012
TÓM TꢐT LUꢑN VĂN THꢂC SĨ KHOA HꢃC
* Có thꢀ tìm hiꢀu luꢁn văn tꢂi:
- Trung tâm Thông tin - Hꢅc liꢇu, Đꢁi hꢅc Đà Nꢍng
- Thư viꢇn trưꢂng Đꢁi hꢅc Sư phꢁm, Đꢁi hꢅc Đà Nꢍng.
Đà Nꢒng - Năm 2012
3
4
chꢃ yꢁu tꢄ cꢃ nén ꢅ Quꢆng Nam
2. Mꢗc ñích nghiên cꢘu
Mꢌ ĐꢅU
1. Lý do chꢕn ñꢖ tài
-
-
Xây dꢝng qui trình chiꢎt tách chꢋt kháng sinh thꢝc vꢈt.
Xác ñꢚnh công thꢕc cꢋu tꢁo, danh pháp cꢠa các phytoncid chꢠ
yꢎu có trong dꢚch chiꢎt cꢠa cꢠ nén.
Ai cũng biꢎt rꢏng: Ăn ꢐ và mꢑc là nhu cꢒu không thꢓ thiꢎu
ñꢌi vꢃi con ngưꢂi. Chính vì thꢎ chꢎ biꢎn món ăn ngon hꢔ trꢀ cho sꢕc
khꢖe con ngưꢂi luôn ñưꢀc khuyꢎn khích ñꢗ cao. Đꢌi vꢃi ngưꢂi Viꢇt
Nam chúng ta vꢋn ñꢗ sꢘ dꢙng món ăn hꢀp lí luôn ñưꢀc nhân dân ta
chú trꢅng ñúng mꢕc. Có thꢓ thꢋy mꢔi món hꢀp vꢃi mꢉt sꢌ gia vꢚ nhꢋt
ñꢚnh. chꢛ có khi nào dùng ñúng món ăn mꢃi phát huy hꢎt công dꢙng
ví dꢙ: Vꢚt cꢒn gꢜng, gà cꢒn chanh, bò nưꢃng cꢒn nén, heo cꢒn hành…
Có thꢓ nói gia vꢚ là mꢉt phꢒn không thꢓ thiꢎu, vꢗ trꢝc giác nó là chꢋt
ñiꢗu vꢚ giúp gia tăng hương vꢚ và màu sꢞc và tăng sꢝ hꢋp dꢄn cho
món ăn ñiꢗu này mꢉt phꢒn giúp cho sꢝ tiêu hóa và hꢋp thꢙ thꢕc ăn tꢌt
hơn nhưng vꢗ sâu xa sꢘ dꢙng gia vꢚ là tꢈn hưꢐng hoꢁt chꢋt kháng
sinh thꢝc vꢈt – phytolcid có công dꢙng giúp cơ thꢓ kháng khuꢟn. Có
thꢓ thꢋy công dꢙng cꢠa mꢔi loꢁi gia vꢚ luôn tꢊn tꢁi trong kho tàng tri
thꢕc nhân gian có loꢁi ñã ñưꢀc khoa hꢅc chꢕng minh rõ ràng như
nghꢇ, gꢜng, tꢖi… Nhưng cũng có loꢁi gia vꢚ ñưꢀc dùng như mꢉt vꢚ
thuꢌc trong dân gian nhưng chưa hiꢓu rõ công dꢙng thꢝc như cꢠ nén,
kiꢇu…
-
Xác ñꢚnh khꢆ năng kháng khuꢟn cꢠa dꢚch chiꢎt tꢜ cꢠ nén.
3. Đꢏi tưꢙng và phꢚm vi nghiên cꢘu
Đꢌi tưꢀng nghiên cꢕu: Cꢘ nén ꢐ Quꢆng Nam
Nơi thꢝc hiꢇn: Phòng thí nghiꢇm Trưꢂng ĐHSP thành phꢌ ĐÀ
NꢣNG và các trung tâm khác.
4. Phương pháp nghiên cꢘu
4.1. Phương pháp vꢇt lí
- Xác ñꢚnh ñꢉ ꢟm cꢠa cꢠ nén
4.2. Phương pháp hóa hꢈc
- Xác ñꢚnh mꢉt sꢌ thành phꢒn hóa hꢅc cꢠa cꢠ nén
4.3. Phương pháp hóa lý:
- Xác ñꢚnh khꢆ năng hꢋp phꢙ bꢏng UV/VIS
- Đꢚnh danh các phytolcid bꢏng phương pháp GC/MS
4.4. Phương pháp hóa sinh
- Sꢘ dꢙng phương pháp Ferry cyanure ñꢓ xác ñꢚnh hàm lưꢀng
glucid tꢤng
Nén hay hành tăm có nguꢊn gꢌc tꢁi Bꢞc Á, Bꢞc Âu châu và
Bꢞc Mꢡ, ñã ñưꢀc trꢊng và sꢘ dꢙng tꢜ hơn 5000 năm. ꢢ Viꢇt Nam
nén ñưꢀc trꢊng tꢜ rꢋt lâu ñꢂi tuy nhiên chꢛ ñưꢀc trꢊng ñꢁi trà và có
chꢋt lưꢀng tꢌt ꢐ vùng ñꢋt tꢜ Quꢆng Nam ra Quꢆng Trꢚ, nhiꢗu nhꢋt là
ꢐ Nghꢇ An. nén thưꢂng trꢊng làm rau ăn và lꢋy cꢠ làm thuꢌc.
Xuꢋt phát tꢜ nguꢊn nguyên liꢇu dꢊi dào cꢠa Quꢆng Nam và
ñꢓ biꢎt rõ công dꢙng cꢠa các phytoncid trong cꢠ nén, chúng tôi mꢁnh
dꢁn chꢅn ñꢗ tài : Nghiên cꢀu chiꢁt tách và ñꢂnh danh các phytoncid
4.5. Phương pháp vi sinh
- Xác ñꢚnh khꢆ năng kháng khuꢟn cꢠ dꢚch chiꢎt cꢠ nén
5. Ý nghĩa khoa hꢕc và thꢛc tiꢜn:
5.1. Ý nghĩa khoa hꢈc
- Chiꢎt tách phytoncid tꢜ cꢠ nén.
- Đꢚnh danh các phytoncid chꢠ yꢎu tꢜ cꢠ nén.
5.2. Ý nghĩa thꢉc tiꢊn
5
6
- Vai trò cꢠa phytolcid tꢜ loꢁi gia vꢚ này vào thꢝc tꢎ mꢉt cách
khoa hꢅc hơn
1.3.2.6. Khuꢄy trꢆn
1.3.3. Mꢒt sꢓ dung môi thưꢗng sꢘ dꢑng trong chiꢁt tách
1.3.4. Mꢤt sꢏ phương pháp tách chiꢣt thưꢥng dùng :
1.3.4.1. Ngâm
6. Cꢝu trúc luꢞn văn
Chương 1. TꢥNG QUAN TÀI LIꢦU
Chương 2. ĐꢧI TƯꢨNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CꢩU
Chương 3. KꢪT QUꢫ VÀ THꢫO LUꢬN
1.3.4.2. Phương pháp chiꢉt xuꢄt ngꢄm kiꢋt
1.3.4.3. Phương pháp chiꢉt tách ngưꢃc dòng
1.3.4.4. Chiꢉt xuꢄt bꢍng khí hóa lꢎng siêu tꢏi hꢂn
1.3.4.5. Chiꢉt siêu âm
CHƯƠNG 1.
TꢟNG QUAN TÀI LIꢠU
1.4. Tình hình nghiên cꢘu vꢖ hꢕ hành tꢦi trên thꢣ giꢡi và trong
nưꢡc
1.1. Giꢡi thiꢢu chung vꢖ cây nén (Hành tăm)
1.1.1. Đꢋc ñiꢌm thꢉc vꢇt và phân loꢍi
1.1.2. Thành phꢎn hóa hꢈc
CHƯƠNG 2
ĐꢉI TƯꢧNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CꢇU
2.1. Nguyên liꢢu, hóa chꢝt và thiꢣt bꢨ nghiên cꢘu
2.1.1. Nguyên liꢖu nghiên cꢀu
1.2. Giꢡi thiꢢu chung vꢖ chꢝt kháng sinh thꢛc vꢞt – phytoncid
1.2.1 Đꢂnh nghĩa
1.2.2. Phân loꢍi
Nguyên liꢇu thꢝc nghiꢇm là cꢠ nén tꢁi Quꢆng Nam
2.1.2. Hóa chꢏt và thiꢁt bꢂ
1.2.3. Tính chꢏt
1.2.4. ꢐng dꢑng cꢃa phytoncid.
1.2.5. Mꢒt sꢓ hꢔp chꢏt chính có trong hꢈ hành tꢕi
1.2.5.1. Hꢃp chꢄt Allicin
2.1.3. Nơi thꢉc hiꢖn nghiên cꢀu
2.2. Phương pháp nghiên cꢘu
2.2.1. Phương pháp vꢇt lý: Xác ñꢂnh hàm lưꢔng nưꢙc có trong
nguyên liꢖu
1.2.5.2. Hꢃp chꢄt Diallyl disunfide.
1.3. Phương pháp tách chiꢣt các hꢙp chꢝt phytoncid
1.3.1. Khái niꢖm
2.2.2. Phương pháp hóa hꢈc: Xác ñꢂnh phytoncid
2.2.3.Phương pháp hóa sinh:
1.3.2. Các yꢁu tꢓ ꢆnh hưꢅng ñꢁn quá trình chiꢁt tách
1.3.2.1. Dung môi
2.2.3.1. Xác ñꢈnh hàm lưꢃng glucid tꢐng
2.2.3.2. Xác ñꢈnh hàm lưꢃng nitơ tꢐng sꢑ
2.2.3.3. Đo quang phꢐ hꢄp thꢒ phân tꢓ UV/VIS
2.2.4. Phương pháp hóa lý
1.3.2.2. Nꢅng ñꢆ cꢇa dꢈch chiꢉt
1.3.2.3. Đꢊc ñiꢀm cꢇa nguyên liꢋu
1.3.2.4. Nhiꢋt ñꢆ
2.2.4.1. Xác ñꢈnh hàm lưꢃng các nguyên tꢑ vi lưꢃng
2.2.4.2. Đo quang phꢐ hꢄp thꢒ phân tꢓ UV/VIS
1.3.2.5. Thꢌi gian
7
8
2.2.4.3 Phương pháp sꢔc kí khí ghép khꢑi phꢐ (GC/MS )
2.2.5. Phương pháp vi sinh vꢇt
lưꢀng nưꢃc có trong nguyên liꢇu là mꢉt trong nhꢭng yꢎu tꢌ gây ꢆnh
hưꢐng ñꢎn hiꢇu quꢆ chiꢎt tách. Đꢓ nâng cao hiꢇu suꢋt chiꢎt tách các
hꢀp chꢋt mong muꢌn tꢜ nguyên liꢇu tươi, rꢋt cꢒn phꢆi loꢁi bꢖ hoàn
toàn nưꢃc ra khꢖi nguyên liꢇu trưꢃc khi tiꢎn hành chiꢎt tách. Vì vꢈy
trong quá trình xꢘ lý và làm nhꢖ nguyên liꢇu ngưꢂi ta thưꢂng bꢤ sung
mꢉt lưꢀng chꢋt hút ꢟm phù hꢀp (Na2SO4) ñꢓ loꢁi nưꢃc. Khꢌi lưꢀng
chꢋt hút ꢟm cꢒn dùng tùy thuꢉc vào khꢌi lưꢀng và ñꢉ ꢟm cꢠa nguyên
liꢇu chiꢎt tách. Theo A.F.Nametnhicov [12], ñꢌi vꢃi loꢁi chꢋt hút ꢟm
Na2SO4, khꢌi lưꢀng chꢋt hút ꢟm cꢒn dùng là 40- 45g Na2SO4 / 5 g
nguyên liꢇu tươi.
CHƯƠNG 3
KꢈT QUꢍ VÀ THꢍO LUꢑN
3.1. Xác ñꢨnh mꢤt sꢏ thành phꢩn hóa hꢕc có trong cꢪ nén
Trong nghiên cꢕu này, chúng tôi xác ñꢚnh mꢉt sꢌ thành phꢒn
hóa hꢅc và các nguyên tꢌ kim loꢁi sau:
+ Hàm lưꢀng nưꢃc
+ Hàm lưꢀng gluxid tꢤng
+ Hàm lưꢀng protein
- Hàm lưꢀng glucid tꢤng trong cꢠ nén ꢐ Quꢆng Nam là xꢋp
xꢛ vꢃi hàm lưꢀng gluxid tꢤng trong thành phꢒn hóa hꢅc cꢠa cꢠ nén
theo tài liꢇu [6]. So vꢃi hàm lưꢀng glucid trong cꢠ tꢖi thì hàm lưꢀng
glucid trong cꢠ nén thꢋp hơn nhiꢗu ꢐ tꢖi thành phân glucid chiꢎm
40%..
+ Hàm lưꢀng các nguyên tꢌ: canxi, natri, kali, magie
Kꢎt quꢆ xác ñꢚnh ñưꢀc trình bày trên bꢆng 3.1.
Bꢫng 3.1. Hàm lưꢙng nưꢡc cꢪa các nguyên liꢢu tươi ñưꢙc nghiên
cꢘu
- Protein là mꢉt thành phꢒn dưꢮng chꢋt quan trꢅng nhưng lꢁi
là thành phꢒn không có lꢀi cho quá trình chiꢎt tách. Nhưng trong cꢠ
nén thì hàm lưꢀng protein không ñáng kꢓ. Do vꢈy không ꢆnh hưꢐng
nhiꢗu ñꢎn quá trình chiꢎt tách.
Thành phꢩn
Nưꢃc
Đơn vꢨ tính
% khꢌi lưꢀng
%(CK)
Hàm lưꢙng
86,3
Glucid tꢤng
Protein
Canxi
6,53
%(CK)
1,59
Kꢎt quꢆ phân tích hàm lưꢀng, các nguyên tꢌ vi lưꢀng trong
cꢠ nén cho thꢋy: hàm lưꢀng các nguyên tꢌ Ca, K, Na, Mg, so vꢃi hꢅ
hành tꢖi là gꢒn bꢏng nhau [7],[9].
% CK
0,04
Kali
% CK
0,25
Magie
% CK
0,03
Vꢈy vꢃi mꢉt sꢌ thành phꢒn trong cꢠ nén có thꢓ xꢎp nén vào
hꢅ hành tꢖi.
Natri
% CK
0,02
Nhꢈn xét:
Tꢜ lâu, trong dân gian ngưꢂi ta thưꢂng sꢘ dꢙng nén làm gia
vꢚ, chꢭa các bꢇnh do thꢂi tiꢎt… hiꢇu quꢆ song chưa có nhꢭng minh
chꢕng cho thꢋy cꢠ nén có ñưꢀc nhꢭng công dꢙng ñó là do trong cꢠ
nén có chꢕa hꢀp chꢋt phytoncid – kháng sinh thꢝc vꢈt nên nhꢭng
- Hàm lưꢀng nưꢃc cꢠa các nguyên liꢇu tươi nꢏm trong
khoꢆng 86,3% là hoàn toàn phù hꢀp vꢃi hàm lưꢀng nưꢃc ñã ñưꢀc
công bꢌ trên tài liꢇu [37].
Trong quá trình chiꢎt tách ñꢌi vꢃi nguyên liꢇu tươi, hàm
9
10
Allicin
4
5.728
8.169
0.15
0.42
nghiên cꢕu sau sꢯ giúp chꢕng minh nhꢭng ñiꢗu cꢒn biꢎt vꢗ giá trꢚ
dưꢀc lý cꢠa cꢠ nén.
3.2. Xác ñꢨnh mꢤt sꢏ cꢝu tꢬ cꢪa hꢭn hꢙp chiꢣt
Dꢝa theo tài liꢇu nghiên cꢕu [15],[16] vꢗ xác ñinh mꢉt sꢌ
thành phꢒn cꢠa tꢖi. Mà nén cũng thuꢉc hꢅ hành tꢖi nên tôi áp dꢙng
quy trình ngâm chiꢎt tꢖi ñꢌi vꢃi nén: tiꢎn hành ngâm chiꢎt cꢠ nén giã
nát trong dung môi cꢊn 960 vꢃi tꢛ lꢇ dung môi/nguyên liꢇu:
80/10(ml/g) thꢂi gian ngâm là 30 ngày và ꢐ nhiꢇt ñꢉ 200C, pH=7.
Sau khi chiꢎt rút hꢔn hꢀp dꢚch chiꢎt ñưꢀc tiꢎn hành ñꢚnh danh các cꢋu
tꢘ bꢏng phương pháp GC/MS.
5
6
Dialyl disulfide
12.450 1.2
12.775 0.32
n-
hexadecanoic
acid
Tꢜ các kꢎt quꢆ phân tích phꢤ GC-MS, mꢉt sꢌ cꢋu tꢘ chính
có trong dꢚch chiꢎt cꢠ nén ñưꢀc trình bày ꢐ bꢆng
7
8
hexadecanoic
acid ethyl ester
Bꢫng 3.2. Mꢤt sꢏ hꢙp chꢝt phytolcid có trong dꢨch chiꢣt cꢪ nén
S
T
T
1
Thꢂi
gian
lưu
Phꢒn
trăm
(%)
Đꢚnh danh
Công thꢕc cꢋu tꢁo
17.230 0.66
Hexadecanoic
acid,2- hydroxy
-1-(hydroxy
metyl)ethyl
ester
OH
O
O
4.161
1.01
1,2-
C2H5
benzenediol
9
18.637 1.54
9,12-
octadecadienoi
c acid (z,z)-,2-
hydroxy-1-
(hydroxymethy
l) ethyl ester
2
3
4.516
5.146
8.85
0.78
4-
mecaptophenol
1,2-
benzenediol,4 –
methyl
11
12
Tꢜ kꢎt quꢆ phꢤ hình 3.1 và bꢆng 3.2 ñã xác ñꢚnh ñưꢀc thành
phꢒn mꢉt sꢌ phytoncid chꢠ yꢎu có trong dꢚch chiꢎt cꢠ nén: 1,2-
benzenediol, 4-mecaptophenol, 1,2-benzenediol-4–methyl; Allicin;
Diallyl disulfide; n- hexadecanoic acid; hexadecanoic acid ethyl
ester; Hexadecanoic acid,2- hydroxy -1-(hydroxy metyl)ethyl ester;
9,12-octadecadienoic acid (z,z)-,2-hydroxy-1-(hydroxymethyl) ethyl
ester.
[39], [40] cho thꢋy cꢠ nén chꢕa 2 hꢀp chꢋt mang ñꢑc tính sinh hꢅc có
trong hꢅ hành tꢖi ñó là: Diallyl disulfide, allicin.
Diallyl disulfide là hꢀp chꢋt hꢭu cơ không phân cꢝc, nên tiꢎn
hành chiꢎt tách diallyl disulfide trong dung môi hꢭu cơ không phân
cꢝc (n- hexan, ete dꢒu hꢖa, axeton, cꢊn 960).
Giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang diallyl disulfide ñưꢀc biꢓu diꢰn trên
hình 3.3
So vꢃi thành phꢒn hóa hꢅc trong cꢠ tꢖi ꢐ tài liꢇu [9],[24] ñã
công bꢌ trong thành phꢒn hóa hꢅc cꢠa tꢖi cũng có chꢕa allicin; diallyl
disulfide; Ajoen; diallyl trisulfid… Và cũng chꢕng minh ñưꢀc allicin,
diallyl disulfide; ajoen là nhꢭng hꢀp chꢋt có khꢆ năng kháng khuꢟn
cao có tính chꢋt quyꢎt ñꢚnh khꢆ năng kháng khuꢟn cꢠa dꢚch chiꢎt tꢖi.
Nên tiꢎn hành khꢆo sát các yꢎu tꢌ ꢆnh hưꢐng ñꢎn hiꢇu suꢋt thu hꢊi
allicin và diallyl disulfide. Mꢑt khác xét vꢗ mꢑc tính chꢋt thì allicin là
chꢋt không màu, dꢰ bꢚ oxy hóa làm cho hoꢁt tính kháng khuꢟn giꢆm
ñi nhiꢗu. Còn diallyl disulfide là chꢋt có màu, bꢗn hơn allicin. Bꢏng
phương pháp ño quang phꢤ có thꢓ xác ñꢚnh ñưꢀc hàm lưꢀng cꢠa
diallyl disulfide ꢐ λmax = 240nm [28],[33]. Đꢓ chꢕng minh xem vꢃi
ñiꢗu kiꢇn ngâm chiꢎt tꢖi có phꢆi là tꢌi ưu ñꢌi vꢃi cꢠ nén hay không
nên tôi tiꢎn hành khꢆo sát các yꢎu tꢌ ꢆnh hưꢐng ñꢎn hiꢇu suꢋt thu hꢊi
phytolcid mà cꢙ thꢓ là diallyl disulfide.
Giá trꢀ mꢁt ñꢂ quang thu ñưꢃc
1.4000
1.2000
1.0000
0.8000
0.6000
0.4000
0.2000
0.0000
1.2004
1.0573
0.9732
0.8698
ete dꢄu hꢅa n-hexan
axeton
cꢆn 96
Dung môi
Hình 3.3. So sánh hiꢢu quꢫ chiꢣt diallyl disulfide tꢮ cꢪ nén
ꢯ Quꢫng Nam bꢰng dung môi hꢎu cơ khác nhau trong cùng
ñiꢖu kiꢢn
Nhꢈn xét: Tꢜ hình 3.3, cho thꢋy Khi chiꢎt vꢃi các loꢁi dung môi
khác nhau thì hàm lưꢀng diallyl disulfide thu ñưꢀc cũng hoàn toàn
khác nhau. Khi sꢘ dꢙng dung môi là ete dꢒu hꢖa, n- hexan, axeton,
cꢊn 960 cho giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang thu ñưꢀc lꢒn lưꢀt là: 1,2004; 1,0573;
0,9732; 0,8698..
3.3. Chꢕn dung môi chiꢣt tách các phytoncid chꢪ yꢣu trong cꢪ
nén
Thông thưꢂng yêu cꢒu dung môi phꢆi hòa tan tꢌt các cꢋu tꢘ
cꢒn chiꢎt, nꢎu cꢋu tꢘ cꢒn chiꢎt có cꢋu tꢁo phân cꢝc thì phꢆi chꢅn dung
môi phân cꢝc như nưꢃc, ethanol, methanol..... Ngưꢀc lꢁi nꢎu cꢋu tꢘ
cꢒn chiꢎt không phân cꢝc thì phꢆi lꢝa chꢅn dung môi không phân cꢝc
như benzen, n- hexan, ete dꢒu hꢖa, cꢊn cao ñꢉ... Dꢝa trên các tư liꢇu
Cꢙ thꢓ khi chiꢎt vꢃi axeton giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang thu ñưꢀc gꢋp
1.12 lꢒn so vꢃi chiꢎt vꢃi cꢊn 960C, chiꢎt bꢏng ete dꢒu hꢖa cho giá trꢚ
mꢈt ñꢉ quang cao nhꢋt và gꢋp 1,38 lꢒn so vꢃi khi dùng dung môi là
13
14
cꢊn 960C. Tꢜ kꢎt quꢆ thu ñưꢀc, hiꢇu suꢋt chiꢎt tách diallyl disulfide
bꢏng dung môi ñưꢀc sꢞp xꢎp theo thꢕ tꢝ giꢆm dꢒn, có nghĩa là ete
dꢒu hꢖa > n- hexan > axeton > cꢊn 960C.
tươi ñꢎn hiꢇu quꢆ chiꢎt diallyl disulfide, tôi tiꢎn hành khꢆo sát ꢐ các tꢛ
lꢇ dung môi/ nguyên liꢇu tươi như sau: 50/10 ; 60/10 ; 70/10 ; 80/10;
90/10; 100/10 (ml/g)
Sꢝ khác nhau vꢗ hiꢇu quꢆ chiꢎt cꢠa dung môi có thꢓ ñưꢀc
giꢆi thích như sau: Hiꢇu quꢆ chiꢎt cꢠa dung môi phꢙ thuꢉc vào khꢆ
năng khuꢎch tán cꢠa dung môi vào sâu bên trong lꢃp nguyên liꢇu.
Cꢆ 4 loꢁi dung môi ñưꢀc nghiên cꢕu ñꢗu có khꢆ năng chiꢎt
ñưꢀc diallyl disulfide, nhưng mꢔi loꢁi dung môi lꢁi có nhꢭng ưu
nhưꢀc ñiꢓm riêng. Dung môi ete dꢒu hꢖa và n-hexan ñꢗu cho khꢆ
năng chiꢎt như nhau và cho giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang cao nhꢋt nhưng ñꢗ
tài tiꢎn hành chiꢎt mꢉt sꢌ phytolcid chꢠ yꢎu trong dꢚch chiꢎt cꢠ nén
mà trong dꢚch chiꢎt ngoài diallyl disulfide là mꢉt phytoncid có hoꢁt
tính kháng khuꢟn cao thì còn có allicin là mꢉt chꢋt có khꢆ năng
kháng khuꢟn mꢁnh không kém thưꢂng có hàm lưꢀng cao [22] trong
cꢠ nén ñưꢀc giã nát. Mꢑc khác, vꢗ mꢑt tính chꢋt hóa hꢅc allicin lꢁi là
chꢋt tan tꢌt trong etanol 95% và ete dꢒu. [39].
Giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang diallyl disulfide ñưꢀc biꢓu diꢰn trên
hình 3.5
0.88
0.8643
0.86
0.8457
0.84
0.8259
0.82
0.8
0.7925
0.78
0.7683
0.7562
0.76
0.74
0.72
0.7
50/10
60/10
70/10
80/10
90/10
100/10
Tꢅ lꢆ dung môi/nguyên liꢆu (ml/g)
Hình 3.5. ꢍnh hưꢯng cꢪa tꢱ dung môi cꢲn 960/ nguyên liꢢu cꢪ
nén giã nát ñꢣn giá trꢨ mꢞt ñꢤ quang thu ñưꢙc
Dꢝa vào tính chꢋt cꢠa hai hꢀp chꢋt có tính kháng khuꢟn cao
là allicin và diallyl disulfide nên có thꢓ dùng dung môi cꢊn 960 hoꢑc
ete dꢒu ñꢓ ngâm chiꢎt nhưng nén chꢠ yꢎu dùng làm gia vꢚ trong chꢎ
biꢎn thꢝc phꢟm nên sꢘ dꢙng ethanol 960 là phù hꢀp. Hơn nꢭa, ete dꢒu
hꢖa có tính ñꢉc, chi phí lꢁi cao nên cho dù hiꢇu suꢋt chiꢎt tách cao
hơn so vꢃi ethanol. Nên tôi chꢅn dung môi cꢊn 960 ñꢓ tiꢎn hành các
thí nghiꢇm tiꢎp theo.
Nhꢈn xét: Kꢎt quꢆ trên ñꢊ thꢚ hình 3.5 cho thꢋy: khi tăng tꢛ lꢇ dung
môi/ nguyên liꢇu tươi, nhìn chung hàm lưꢀng diallyl disulfide thu
ñưꢀc cũng tăng dꢒn và ñꢁt cꢝc ñꢁi khi tꢛ lꢇ này là 80/10 (ml/g). Khi
thay ñꢤi tꢛ lꢇ tꢜ 70/10 ñꢎn 80/10 thì giá tri mꢈt ñꢉ quang diallyl
disulfide thu ñưꢀc tăng, khi vưꢀt qua ngưꢮng cꢝc ñꢁi này thì giá tri
mꢈt ñꢉ quang diallyl disulfide bꢞt ñꢒu giꢆm dꢒn. Như vꢈy tùy thuꢉc
vào tꢛ lꢇ dung môi/ nguyên liꢇu tươi khác nhau mà hiꢇu suꢋt chiꢎt
diallyl disulfide sꢯ khác nhau. Khi sꢘ dꢙng tꢛ lꢇ dung môi/nguyên
liꢇu tươi cao ñꢊng nghĩa vꢃi lưꢀng dung môi sꢘ dꢙng lꢃn, sꢯ giúp
hòa tan triꢇt ñꢓ lưꢀng diallyl disulfide có trong nguyên liꢇu làm cho
hiꢇu quꢆ chiꢎt cao. Ngưꢀc lꢁi khi sꢘ dꢙng tꢛ lꢇ này nhꢖ sꢯ không ñꢠ
3.4. Khꢫo sát các yꢣu tꢏ ꢫnh hưꢯng ñꢣn hiꢢu suꢝt chiꢣt tách mꢤt
sꢏ phytoncid chꢪ yꢣu tꢮ cꢪ nén.
3.4.1 Khꢆo sát ꢆnh hưꢅng cꢃa tꢚ lꢖ dung môi/nguyên liꢖu tươi
(ml/g) ñꢁn hiꢖu suꢏt chiꢁt tách
Đꢓ khꢆo sát sꢝ ꢆnh hưꢐng cꢠa tꢛ lꢇ dung môi/ nguyên liꢇu
15
16
cꢪa diallyl disulfide
dung môi hòa tan hꢎt ñưꢀc diallyl disulfide trong nguyên liꢇu nên
hiꢇu quꢆ chiꢎt thꢋp. Tuy nhiên khi ñã ñꢁt ñꢎn mꢕc ñꢉ chiꢎt cao nhꢋt
nꢎu vꢄn tiꢎp tꢙc tăng thꢓ tích dung môi sꢯ không mang lꢁi hiꢇu quꢆ vì
lúc ñó mꢉt sꢌ tꢁp chꢋt cũng bꢚ chiꢎt theo và gây lãng phí dung môi.
Kꢎt quꢆ thí nghiꢇm khꢆo sát nêu trên cho hiꢇu quꢆ chiꢎt
diallyl disulfide cao nhꢋt ꢐ tꢛ lꢇ 80/10 (ml/g).
Kꢎt quꢆ ꢐ hình 3.7 cho thꢋy: ꢩng vꢃi các nhiꢇt ñꢉ chiꢎt khác
nhau cho giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang thu ñưꢀc cũng có sꢝ khác biꢇt rõ rꢇt.
Điꢗu ñó cho thꢋy nhiꢇt ñꢉ là mꢉt trong nhꢭng yꢎu tꢌ có ꢆnh hưꢐng
ñꢎn quá trình chiꢎt tách.
Khi tăng nhiꢇt ñꢉ thì giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang diallyl disulfide thu
ñưꢀc cũng tăng dꢒn và ñꢁt cꢝc ñꢁi ꢐ 250C. Tuy nhiên khi nhiꢇt ñꢉ
tiꢎp tꢙc ñưꢀc tăng lên 300C thì giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang giꢆm. Nhìn
chung giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang thu ñưꢀc tương ñꢌi cao khi nhiꢇt ñꢉ dao
ñꢉng tꢜ 20- 250C.
3.4.2. Khꢆo sát ꢆnh hưꢅng cꢃa nhiꢖt ñꢒ ñꢁn hiꢖu suꢏt thu hꢛi
diallyl disulfide
Tùy thuꢉc vào tính chꢋt cꢠa cꢋu tꢘ cꢒn chiꢎt và dung môi mà
lꢝa chꢅn nhiꢇt ñꢉ cho phù hꢀp.
Tiꢎn hành thí nghiꢇm: Cho lꢒn lưꢀt vào 6 bình cꢒu, mꢔi bình
10 gam cꢠ nén ñã ñưꢀc xꢘ lý và 80ml cꢊn 960. Tiꢎn hành ngâm chiꢎt
trong 30 ngày lꢒn lưꢀt ꢐ các mꢕc nhiꢇt ñꢉ : 50C, 100C, 150C, 200C,
250C, 300C. Dung dꢚch chiꢎt ñưꢀc gia nhiꢇt bꢏng thiꢎt bꢚ tꢝ ñꢉng ñꢓ
ñꢁt nhiꢇt ñꢉ yêu cꢒu trong thꢂi gian ngâm chiꢎt 30 ngày.
Dꢚch chiꢎt thu ñưꢀc ñưꢀc xác ñꢚnh giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang (A)
trên thiꢎt bꢚ ño quang UV/VIS.
Nhiꢇt ñꢉ cao có tác dꢙng tăng tꢌc ñꢉ khuꢎch tán và giꢆm ñꢉ
nhꢃt cꢠa dung dꢚch, giúp các phân tꢘ cꢒn chiꢎt dꢰ dàng khuꢎch tán
trong lòng các phân tꢘ cꢠa dung môi do ñó, làm tăng tꢌc ñꢉ khuꢎch
tán dꢄn ñꢎn hiꢇu quꢆ thu hꢊi dꢚch chiꢎt mang cꢋu tꢘ cꢒn chiꢎt tꢌt hơn.
Mꢑt khác, nhiꢇt ñꢉ giúp làm biꢎn tính màng tꢎ bào và phá hꢠy màng
tꢎ bào nhꢂ các bꢅt khí tꢁo thành làm cho quá trình chiꢎt tách dꢰ dàng
hơn. Tuy nhiên ñiꢗu này không có nghĩa là càng tăng nhiꢇt ñꢉ thì
hiꢇu quꢆ chiꢎt tách cũng tăng theo, bꢐi vì khi nhiꢇt ñꢉ quá cao có thꢓ
làm biꢎn ñꢤi tính chꢋt cꢠa diallyl disulfide. Nhìn chung hàm lưꢀng
diallyl disulfide thu ñưꢀc tương ñꢌi cao khi nhiꢇt ñꢉ dao ñꢉng trong
khoꢆng 200 – 250C. Mꢑc khác mꢉt hꢀp chꢋt khác có khꢆ năng kháng
khuꢟn cao nhꢋt là allicin lꢁi là chꢋt không bꢗn và dꢰ dàng bꢚ oxy hóa,
mꢋt tác dꢙng ꢐ 250C và nhiꢇt ñꢉ cao hơn.
Giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang diallyl disulfide ñưꢀc biꢓu diꢰn trên
hình 3.7
A(nm)
0.88
0.8693
0.8675
0.8563
0.87
0.86
0.85
0.84
0.83
0.82
0.8662
0.8352
0.8274
Theo kꢎt quꢆ nghiên cꢕu trên tꢁp chí World Health
Organization [18], vꢗ thành phꢒn hóa hꢅc cꢠa cꢠ tꢖi khi chiꢎt vꢃi
dung môi ethanol ꢐ nhiꢇt ñꢉ 00C- 50C trong thành phꢒn chꢠ yꢎu là
alliin, ꢐ 20- 250C alliin không còn mà chuyꢓn vꢗ allicin và diallyl
disulfide, ꢐ nhiꢇt ñꢉ cao hơn >250C – <1000C allicin bꢞt ñꢒu bꢚ oxy
0
5
10 15 20 25 30
Nhiꢆt ñꢂ (oC)
Hình 3.7. ꢍnh hưꢯng cꢪa nhiꢢt ñꢤ chiêt ñꢣn giá trꢨ mꢞt ñꢤ quang
17
18
hóa chuyꢓn thành diallyl disulfide và 1000C hoàn toàn không còn
allicin. Dꢝa vào kꢎt quꢆ thꢝc nghiꢇm (hình 3.7), chꢅn nhiꢇt ñꢉ 200C
làm nhiꢇt ñꢉ ngâm chiꢎt cho các thí nghiꢇm tiꢎp sau.
3.4.3. Khꢆo sát ꢆnh hưꢅng cꢃa thꢗi gian
thì giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang thu ñưꢀc cũng khác nhau. Trong khoꢆng thꢂi
gian ngâm chiꢎt tꢜ 10- 30 ngày nhìn chung thꢂi gian chiꢎt tăng thì giá
trꢚ mꢈt ñꢉ quang tăng. Thꢂi gian chiꢎt ñꢎn 30 ngày thì giá trꢚ mꢈt ñꢉ
quang thu ñưꢀc tăng gꢋp 1,5 lꢒn so vꢃi khi ngâm chiꢎt trong thꢂi gian
10 ngày và giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang ñꢁt cꢝc ñꢁi (0,8692) khi chiꢎt trong
thꢂi gian 30 ngày.
Cũng giꢌng như các yꢎu tꢌ ñã nghiên cꢕu, qui luꢈt khi thꢂi
gian tăng thì hiꢇu suꢋt cũng tăng theo do chꢋt cꢒn chiꢎt có ñꢠ thꢂi
gian ñꢓ khuꢎch tán vào dung môi. Tuy nhiên không nên kéo dài thꢂi
gian chiꢎt quá lâu.
Khi thay ñꢤi thꢂi gian chiꢎt tꢜ 40- 60 ngày giá trꢚ mꢈt ñꢉ
quang thu ñưꢀc bꢞt ñꢒu giꢆm nhꢱ ꢕng vꢃi thꢂi gian ngâm chiꢎt là 40;
50 ngày. Và giꢆm mꢁnh ꢐ thꢂi gian 60.
Thꢂi gian chiꢎt phꢙ thuꢉc vào loꢁi nguyên liꢇu, dung môi sꢘ
dꢙng và nhiꢇt ñꢉ chiꢎt. Theo tài liꢇu [10], [16] ñꢓ chiꢎt tinh dꢒu và
xác ñꢚnh thành phꢒn hóa hꢅc có trong cꢠ tꢖi khi sꢘ dꢙng dung môi
cꢊn 960 thì thꢂi gian ngâm chiꢎt là 30 ngày. Dꢝa theo nghiên cꢕu
trên, trong thí nghiꢇm này các khoꢆng thꢂi gian chiꢎt ñưꢀc khꢆo sát
tꢜ 10 ngày, 20 ngày, 30 ngày, 40 ngày, 50 ngày, 60 ngày.
Giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang diallyl disulfide ñưꢀc biꢓu diꢰn trên
hình 3.9
Điꢗu này cho thꢋy: Thꢂi gian ꢆnh hưꢐng lꢃn ñꢎn hiꢇu quꢆ thu
diallyl disulfide khi chiꢎt. Khi thꢂi gian chiꢎt tăng lên trong giꢃi hꢁn,
các cꢋu tꢘ cꢒn chiꢎt có thꢂi gian ñꢓ hòa tan và khuꢎch tán ra khꢖi
nguyên liꢇu, do ñó khꢌi lưꢀng chꢋt cꢒn chiꢎt thu ñưꢀc sꢯ cao. Tuy
nhiên mꢌi liên hꢇ này chꢛ tuyꢎn tính trong mꢉt giꢃi hꢁn nhꢋt ñꢚnh.Tꢜ
kꢎt quꢆ thꢝc nghiꢇm vꢗ thꢂi gian ngâm chiꢎt, tôi chꢅn thꢂi gian chiꢎt
là 30 ngày, là thꢂi gian cho hiꢇu quꢆ chiꢎt cao nhꢋt.
3.4.4. ꢜnh hưꢅng cꢃa pH
A (nm)
Diallyl disulfide rꢋt bꢗn ꢐ pH kiꢗm và kém bꢗn ꢐ pH acid.
Chính vì thꢎ trong quá trình chiꢎt tách cꢒn chú ý ñꢎn ñꢑc ñiꢓm này ñꢓ
tránh hiꢇn tưꢀng oxy hóa diallyl disulfide, dꢄn ñꢎn tꢤn thꢋt. Mꢑt
khác, môi trưꢂng pH cao còn giúp quá trình chuyꢓn hóa allicin thành
diallyl disulfide.[15],[34]. Mꢉt sꢌ nghiên cꢕu cho rꢏng: pH kiꢗm có
tác dꢙng làm tăng hiꢇu quꢆ quá trình chiꢎt diallyl disulfide, nhưng
cũng có nhꢭng nghiên cꢕu chꢕng minh ngưꢀc lꢁi rꢏng: pH hꢒu như
không ꢆnh hưꢐng ñꢎn hiꢇu quꢆ chiꢎt diallyl disunfide [34],[37]. Đꢓ
khách quan hóa nhꢭng ý kiꢎn trái chiꢗu trên tôi sꢯ khꢆo sát các mꢕc
pH=5, pH= 6, pH= 7, pH= 8, pH= 9, pH= 10
0.8693
0.9
0.8654
0.8576
0.8539
0.8422
0.85
0.8
0.7305
0.75
0.7
0.65
10 20 30 40 50 60
Thꢇi gian (ngày)
Hình 3.9. ꢍnh hưꢯng cꢪa thꢥi gian chiꢣt ñꢣn hiꢢu suꢝt thu nhꢞn
diallyl disulfide
Nhꢈn xét:: Khi tiꢎn hành chiꢎt tách ꢐ các khoꢆng thꢂi gian khác nhau
Kꢎt quꢆ ꢆnh hưꢐng cꢠa pH ñꢎn hiꢇu suꢋt chiꢎt diallyl disulfide
19
20
ñưꢀc thꢓ hiꢇn trên hình 3.11.
pH = 7.
3.5. Đꢝ xuꢏt qui trình ngâm chiꢁt phytoncid tꢄ cꢃ nén
Sau khi nghiên cꢕu ñưꢀc các thông sꢌ tꢌi thích cꢒn chiꢎt cho
quá trình ngâm chiꢎt, kꢎt hꢀp vꢃi tài liꢇu tham khꢆo, tôi tiꢎn hành ñꢗ
xuꢋt qui trình chiꢎt phytoncid tꢜ cꢠ nén theo sơ ñꢊ hình 3.12.
A(nm)
1
0.8814
0.8702
0.8692
0.8061
0.8971
0.8
0.6831
0.6
0.4
0.2
0
Cꢠ nén
5
7
9
Giá trꢀ pH
Làm sꢁch
Hình 3.11. ꢍnh hưꢯng cꢪa pH ñꢣn hiꢢu suꢝt thu hꢲi diallyl
disulfide
Giã nát
10g cꢠ nén + 80g Na2SO4
Dꢝa theo kꢎt quꢆ trên hình 3.11 cho thꢋy khi thay ñꢤi giá trꢚ pH
trong khoꢆng tꢜ 5- 10 giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang tăng lên nhiꢗu so vꢃi mꢄu
không chꢛnh pH. Vì trong môi trưꢂng acid diallyl disulfide không bꢗn
vꢭng dꢰ bꢚ oxy hóa. Ngưꢀc lꢁi trong môi trưꢂng base allicin không
bꢗn phꢆn ꢕng triꢇt ñꢓ nhꢋt tꢁo thành các diallyl disulfide,
vinydithiin...Trong môi trưꢂng hơi acid (pH= 5) phꢆn ꢕng chꢈm 50
lꢒn [34]. Chính vì vꢈy khi pH tăng 8- 10 allicin có trong dꢚch chiꢎt cꢠ
nén ñã chuyꢓn thành diallyl disulfide nên pH tăng lên giá trꢚ mꢈt ñꢉ
quang cũng tăng lên và ꢐ pH =10 giá trꢚ mꢈt ñꢉ quang cao nhꢋt . Mꢑc
dù vꢈy song do allicin là mꢉt chꢋt có tính kháng khuꢟn mꢁnh nꢎu ñꢓ
môi trưꢂng kiꢗm sꢯ mꢋt ñi tính kháng khuꢟn cꢠa allicin. Do ñó, trong
nghiên cꢕu này tôi tiꢎn hành chꢛnh pH cꢠa dꢚch chiꢎt vꢗ 7.
Ngâm chiꢎt
Tꢛ lꢇ cꢊn/ngl: 80/10(ml/g)
t0= 200C; tngâm: 30 ngày, pH =7
Chiꢎt rút
Hꢔn hꢀp dꢚch
chiꢎt
Qua nhꢭng nghiên cꢕu ꢐ trên ñã xác ñꢚnh ñưꢀc các ñiꢗu kiꢇn
chiꢎt mꢉt sꢌ phytolcid chꢠ yꢎu có trong dꢚch chiꢎt cꢠ nén mà cꢙ thꢓ
là diallyl disulfide là: Dung môi cꢲn 960,nhiꢢt ñꢤ chiꢣt 200C,thꢥi
gian chiꢣt 30 ngày , tꢳ lꢢ dung môi/ nguyên liꢢu tươi 80/10 (ml/g),
Hình 3.12. Sơ ñꢲ qui trình ñꢖ xuꢝt ngâm chiꢣt phytoncid tꢮ
cꢪ nén.
21
22
Sau khi chiꢎt rút, hꢔn hꢀp dꢚch chiꢎt ñưꢀc tiꢎn hành ño GC/MS
cꢠa dꢚch chiꢎt ñꢓ ñꢚnh danh mꢉt sꢌ phytolcid có trong dꢚch chiꢎt cꢠ
nén bꢏng phương pháp GC/MS.
thꢠy phân cao nhât 14mm. Khi pha loãng nꢊng ñꢉ 10-1 -10-5 ñưꢂng
kính thay ñꢤi tꢜ 13,5mm- 10mm ñiꢗu này cho thꢋy dꢚch chiꢎt tꢜ cꢠ
nén có khꢆ năng kháng khuꢟn vꢃi Staphylococcus aureus. Theo
nghiên cꢕu cꢠa Chu Mꢁnh Thꢞng và các cꢉng sꢝ [15] khi ngâm chiꢎt
tꢖi, hành tây trong thꢂi gian 30 ngày khꢆ năng kháng khuꢟn cꢠa dꢚch
chiꢎt tꢖi ñꢌi vꢃi Staphylococcus aureus có ñưꢂng kính vòng thꢠy
phân là 17mm, cꢠa hành tây 13,4mm. So vꢃi dꢚch chiꢎt tꢖi, hành tây
khꢆ năng kháng khuꢟn cꢠa dꢚch chiꢎt cꢠ nén ñꢌi vꢃi Staphylococcus
aureus là thꢋp hơn.
Tꢜ viꢇc khꢆo sát các yꢎu tꢌ ꢆnh hưꢐng ñꢎn quá trình ngâm
chiꢎt vꢃi các ñiꢗu kiꢇn: Tꢛ lꢇ dung môi/ nguyên liꢇu; thꢂi gian ngâm
chiꢎt; nhiꢇt ñꢉ; pH như trên cho kꢎt quꢆ tꢌi ưu nên có thꢓ áp dꢙng qui
trình ngâm chiꢎt hành tꢖi vꢃi nén.
3.6. Xác ñꢨnh khꢫ năng kháng khuꢴn cꢪa dꢨch chiꢣt cꢪ nén.
Vꢈt liꢇu thꢘ nghiꢇm: Thꢁch TSA .
Nꢊng ñꢉ thꢘ nghiꢇm: pha loãng mꢄu thꢘ ( C0, 10-1, 10-2, 10-
3,10-4 10-5)
Đꢌi vꢃi Escherichia coli vꢃi nꢊng ñꢉ ban ñꢒu và khi pha
loãng nꢊng ñꢉ tꢜ 10-1 – 10-5 ñưꢂng kính vòng thꢠy phân thay ñꢤi
10mm – 6,5mm. Có thꢓ thꢋy vꢃi nꢊng ñꢉ pha loãng ñó dꢚch chiꢎt cꢠ
nén ꢕc chꢎ ñưꢀc sꢝ phát triꢓn cꢠa khuꢟn Escherichia coli so vꢃi dꢚch
chiꢎt cꢠ tꢖi trong dung môi cꢊn 960 ñưꢂng kính thꢠy phân là 19.5mm
và dꢚch chiꢎt hꢔn hꢀp hꢱ, tꢖi theo tꢛ lꢇ hꢱ: tꢖi = 3:7 ñưꢂng kính vòng
thꢠy phân là 23mm[6] khꢆ năng kháng khuꢟn trong dꢚch chiꢎt cꢠ nén
ñꢌi vꢃi Escherichia coli thꢋp hơn.
,
Chꢠng vi khuꢟn thꢘ nghiꢇm: Escherichia coli ATCC 25922.
Staphylococcus aureus ATCC 25923. Pseudomonas aeruginosa
ATCC 10145. Bacillus subtilis ATCC 6633.
Thꢂi gian nuôi cꢋy: 24 giꢂ. Môi trưꢂng nuôi cꢋy: Thꢁch TSA
Kꢎt quꢆ ñưꢀc trình bày ꢐ bꢆng 3.3
Bꢆng 3.3. Kꢁt quꢆ ño dưꢗng kính vòng thꢃy phân
Đꢌi vꢃi các chꢠng Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis
ñưꢂng kính vòng thꢠy phân giꢆm tꢜ 8 xuꢌng 5mm. Khꢆ năng kháng
khuꢟn cꢠa dꢚch chiꢎt cꢠ nén ñꢌi vꢃi 2 loài vi khuꢟn này không cao
bꢏng Escherichia coli và Staphylococcus aureus.
Vi khuꢴn thꢬ nghiꢢm
Nꢊng ñꢉ (C)
Đưꢥng kính vòng thꢪy phꢴn (mm)
C0
14
10
8
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Pseudomonas
13,5 13
12,5 11
10
6,5
5
Kꢎt quꢆ thꢝc nghiꢇm trên so vꢃi các loài thuꢉc hꢅ hành tꢖi là
phù hꢀp theo các tài liꢇu nghiên cꢕu:
9
8,5
7
8
7
7
6
7,5
- Theo công bꢌ nghiên cꢕu tꢜ tài liꢇu [24], ghi nhꢈn các hꢀp
chꢋt S-Metyl methanenthiosulfinate và S-metyl-2-propene-1-
thiosulfinate, trích tꢜ hꢱ có khꢆ năng diꢇt ñưꢀc E. Coli O-157 : H7 là
vi khuꢟn gây hư hꢁi thꢝc phꢟm. Thí nghiꢇm trong ꢌng nghiꢇm, tác
dꢙng diꢇt khuꢟn cꢠa hꢀp chꢋt allicin có trong tꢖi rꢋt mꢁnh dung dꢚch
aeruginosa
Bacillus subtilis
8
7
6,5
6
6
5
Tꢜ kꢎt quꢆ bꢆng 3.3. ta thꢋy vꢃi nꢊng ñꢉ ban ñꢒu và khi pha
loãng nꢊng ñꢉ 10-1, 10-2, 10-3,10-4 10-5 ñưꢂng kính vòng thꢠy phân
,
thay ñꢤi: ñꢌi vꢃi khuꢟn Staphylococcus aureus có ñưꢂng kính vòng
23
24
Staphylococcusaureus ñꢗ kháng methicillin, Pseudomonasaerinosa,
Esterechia coli và vi khuꢕn Bacillus subtilis. [25]
1/85000- 1/125000 ñꢠ ꢕc chꢎ sinh trưꢐng các trùng Staphylococcus,
Streptococus, trùng thương hàn, phó thương hàn, trꢝc trùng lꢲ.[9]
Có thꢓ giꢆi thích như sau do trong thành phꢒn cꢠa dꢚch chiꢎt
cꢠ nén có chꢕa ñꢊng thꢂi hai loꢁi hꢀp chꢋt có tính kháng khuꢟn rꢋt
mꢁnh ñó là allicin và dialyl disulfide riêng allicin khi pha loãng nꢊng
ñꢉ 1/125000 ñã thꢓ hiꢇn khá rõ ràng khꢆ năng ꢕc chꢎ các vi khuꢟn
(Bacilus subtilis, proteas morgani, salmonella enteritidis, S.
Paradysenteriae, Staph. Aureus, Streptococus viridans, vibrio
cholerae) [21], [31]. Thêm vào ñó hꢀp chꢋt diallyl disulfide cũng có
tính kháng khuꢟn rꢋt cao [22], [38]. Nên tꢜ kꢎt quꢆ trên ta có thꢓ nói
dꢚch chiꢎt tꢜ cꢠ nén trong dung môi cꢊn 960 có khꢆ năng kháng lꢁi
mꢉt sꢌ chꢠng vi khuꢟn thưꢂng gꢑp trong thꢝc phꢟm tꢜ ñây có thꢓ giꢆi
thích ñưꢀc vì sao khi sꢘ dꢙng các cây thuꢉc hꢅ hành tꢖi làm gia vꢚ thì
có khꢆ năng ngăn chꢑn ñưꢀc sꢝ hoꢁt ñꢉng cꢠa vi khuꢟn trong mꢉt
thꢂi gian nhꢋt ñꢚnh ñꢊng thꢂi tꢁo hương vꢚ hꢋp dꢄn cho sꢆn phꢟm sꢘ
dꢙng chúng.
- Tương tꢝ, theo nghiên cꢕu ñã công bꢌ trên tꢁp chí [29]
nghiên cꢕu dꢚch chiꢎt trong cꢠ hành tây kꢎt quꢆ thu ñưꢀc dꢚch chiꢎt
hoꢑc nưꢃc ép cꢠa cꢠ hành tây ꢕc chꢎ ñưꢀc sꢝ tăng trưꢐng cꢠa
Escherichia coli, Serratiamarcescens, loài Streptococcus,
Lactobacillus odontolyticus, Pseudomonas aeruginosa và Salmonella
typhosa. Chiꢎt xuꢋt trong dung môi ete dꢒu hꢖa cꢠa cꢠ hành tây ꢕc
chꢎ sꢝ tăng trưꢐng cꢠa Clostridium paraputrificum và
Staphylococcus aureus. Tinh dꢒu có hoꢁt ñꢉng chꢌng lꢁi mꢉt loꢁt các
loꢁi nꢋm : Aspergillus niger, Cladosporium werneckii,Candida
albicans, Fuarium oxysporium, Saccharomyces cerevisiae,
Geotrichum candidum, Brettanomyces anomalus và Candida
lipolytica.
- Cũng trên tꢁp chí này khi nghiên cꢕu vꢗ cꢠ tꢖi- Bulbus Allii
Sativi có mꢉt loꢁt các hoꢁt tính kháng khuꢟn và chꢌng nꢋm.Kꢎt quꢆ
là khi chiꢎt xuꢋt bꢏng dung môi ethanol và nưꢃc cꢌt cꢠa cꢠ tꢖi ꢕc
chꢎ trong ꢑng nghiꢋm sꢝ tăng trưꢐng cꢠa các loài Bacillus,
Staphylococcus aureus, Shigellasonnei, Erwinia carotovora,
Mycobacterium tuberculosis, Escherichia coli, Pasteurella
multocida, Proteus. [29]
Tꢜ nhꢭng kꢎt quꢆ nghiên cꢕu trên và mꢉt sꢌ nghiên cꢕu vꢗ
khꢆ năng kháng khuꢟn cꢠa các hꢀp hꢀp chꢋt phytolcid có trong hꢅ
hành tꢖi. Có thꢓ nói kꢎt quꢆ thꢝc nghiꢇm vꢗ khꢆ năng kháng khuꢟn
cꢠa dꢚch chiꢎt cꢠ nén ꢐ bꢆng 3.8 trên là là khá ñꢊng nhꢋt nên có thꢓ
xꢎp nén vào hꢅ hành, tꢖi trên phương diꢇn hoꢁt chꢋt sinh hꢅc kháng
khuꢟn.
- Theo Robert Duka, Dorina Ardelean nghiên cꢕu vꢗ
phytolcid có trong cꢠ tꢖi kꢎt quꢆ cho thꢋy allicin trong cꢠ tꢖi và
dihydroallinine trong hành tây ꢕc chꢎ ñưꢀc các vi khuꢟn có trong tꢖi
ñã chꢕng minh ñưꢀc khꢆ năng kháng ñưꢀc các chꢠng vi khuꢟn
25
KꢈT LUꢑN VÀ KIꢈN NGHꢆ
* KꢈT LUꢑN
1.Xác ñꢚnh ñưꢀc mꢉt sꢌ thành phꢒn hóa hꢅc cꢠa cꢠ nén ꢐ Quꢆng
Nam: Nưꢃc: 86,3% ; Glucid tꢤng: 6,53% ; Canxi : 0,04% ; Magiê :
0,03% ; Kali : 0,25% ; Natri: 0,02%
Tꢜ thành phꢒn trên cho thꢋy cꢠ nén hoàn toàn có thꢓ xꢎp vào hꢅ
hành tꢖi
2.Trong 4 loꢁi dung môi thꢝc nghiꢇm: ether dꢒu, n- hexan;
axeton; cꢊn 960 ñã chꢅn cꢊn 960 ñꢓ tiꢎn hành ngâm chiꢎt.
3.Đã xác ñꢚnh ñưꢀc các ñiꢗu kiꢇn ngâm chiꢎt : Nhiꢇt ñꢉ: 200C ;
Thꢂi gian: 30 ngày ; Tꢛ lꢇ dung môi/nguyên liꢇu: 80/10,ml/g ; pH: 7.
Tꢜ ñó ñã ñꢗ xuꢋt qui trình ngâm chiꢎt mꢉt sꢌ phytoncid tꢜ cꢠ nén
4.Bꢏng phương pháp sꢞc ký ghép khꢌi phꢤ ñã xác ñꢚnh ñꢚnh danh
ñưꢀc mꢉt sꢌ phytolcid có trong dꢚch chiꢎt tꢜ cꢠ nén: Allicin, diallyl
disulfide
5.Xác ñꢚnh khꢆ năng kháng khuꢟn cꢠa dꢚch chiꢎt cꢠ nén ñꢌi vꢃi
các vi sinh vꢈt kiꢓm ñꢚnh tương ꢕng vꢃi ñưꢂng kính vòng thꢠy phân
cho tꢜng chꢠng.
* KIꢈN NGHꢆ
Kháng sinh thꢝc vꢈt là nhꢭng hꢀp chꢋt ñưꢀc chiꢎt chꢠ yꢎu tꢜ
thꢝc vꢈt có nhiꢗu công dꢙng ñꢌi vꢃi ngưꢂi và ñꢉng vꢈt nên ñꢓ ñꢆm
bꢆo thu hꢊi ñưꢀc hàm lưꢀng phytoncid tꢜ cꢠ nén cao hơn tinh khiꢎt
hơn, có thꢓ ꢕng dꢙng nhiꢗu trong lĩnh vꢝc sꢕc khꢖe và y hꢅc hơn, tôi
xin có mꢉt sꢌ kiꢎn nghꢚ sau:
1. Dùng phương pháp tách và ñꢚnh lưꢀng allicin, diallyl
disulfide.
2. Nghiên cꢕu mꢉt sꢌ ñiꢗu kiꢇn tꢌi ưu ñꢓ giꢭ hoꢁt tính sinh
hꢅc cꢠa allicin, diallyl disulfide.
13 trang
13260
Free
Bạn đang xem tài liệu "Tóm tắt Luận văn Nghiên cứu chiết tách và định danh một số phytoncid chủ yếu từ củ nén ở Quảng Nam", để tải tài liệu gốc về máy hãy click vào nút Download ở trên
File đính kèm:
- tom_tat_luan_van_nghien_cuu_chiet_tach_va_dinh_danh_mot_so_p.pdf
