Định lượng đồng thời vitamin B1, B6, B12 trong sữa bột và sữa tươi Dielac Grow Plus, Dielac Alpha Gold bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Download

Tạp chí phân tích Hóa, Lý và Sinh học - Tập 25, Số 1/2020

ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI VITAMIN B1, B6, B12 TRONG SỮA BỘT

VÀ SỮA TƯƠI DIELAC GROW PLUS, DIELAC ALPHA GOLD

BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

Đến tòa soạn 3-12-2019

Mai Xuân Trường, Nguyễn Gia Huy

Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên

SUMMARRY

SIMULTANEOUS DETERMINATION OF VITAMINE B1, B6, B12 IN MILK

AND FRESH MILK DIELAC GROW PLUS, DIELAC ALPHA GOLD

BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY METHOD

In this paper we announce the survey results of the optimum conditions to simultaneous determination

of vitamine B1, vitamine B6 and vitamine B12 by high performance liquid chromatography (HPLC)

method and simultaneously quantify vitamine B1, vitamine B6 and vitamine B12 in milk and fresh milk

DIELAC GROW PLUS, DIELAC ALPHA GOLD by HPLC method. The results showed that the error

when determining vitamine B1, vitamine B6 and vitamine B12 are less than 3% with the recovery of

vitamine B1 from 91.35% to 100.81%; of vitamine B6 from 90.446% to 99.12%, of vitamine B12 from

92.38% to 100.68%.

1. MỞ ĐẦU

2. THỰC NGHIỆM

Vitamin B1, B6, B12 có tác dụng hỗ trợ quá

trình sản xuất năng lượng trong cơ thể cũng

như trao đổi chất và chuyển hóa năng lượng

trong tế bào. Vitamin B1, B6, B12 là thành

phần chính trong các loại sữa bột hay sữa tươi.

Việc xác định chính xác hàm lượng vitamin

B1, B6 và B12 được bổ sung rất có ý nghĩa

trong việc đảm bảo quyền lợi và sức khỏe của

người tiêu dùng. Có rất nhiều phương pháp

phân tích đã được nghiên cứu và áp dụng để

xác định hàm lượng vitamin B1, B6, B12 trong

thực phẩm như phương pháp điện hóa, phương

pháp động học huỳnh quang, phương pháp sắc

ký lỏng hiệu năng cao [1, 2]. Trong bài báo

này, chúng tôi thông báo kết quả xác định đồng

thời các vitamin B1, B6, B12 trong sữa bột và

sữa tươi DIELAC GROW PLUS và DIELAC

ALPHA GOLD bằng phương pháp sắc ký lỏng

hiệu năng cao.

2.1. Thiết bị và hóa chất

Thiết bị

Máy máy sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC -

Acquity Arc (Mỹ) kết nối máy tính, Detector

DPA, cột C18 (đường kính hạt pha tĩnh là 5

μm, chiều dài cột tách 250 mm và đường kính

cột 6,1 mm); máy rung siêu âm; Cân phân tích

Scientech SA 210 độ chính xác 0,0001g; Máy

đo pH và các dụng cụ pha chế khác.

Hóa chất

Na₂HPO₄, H₃PO₄, axetonitril, vitamin B1

chuẩn (độ tinh khiết > 97,5%), vitamin B6

chuẩn (độ tinh khiết > 98,8%), vitamin B12

chuẩn (độ tinh khiết > 98,5%) của Merk.

Sữa bột và sữa tươi do công ty Vinamilk sản

xuất: Sữa bột DIELAC GROW PLUS số lô:

E7, ngày sản xuất: 26/02/2019, hạn sử dụng:

26/02/2021; Sữa bột DIELAC ALPHA GOLD

số lô: R3, ngày sản xuất: 26/02/2019, hạn sử

204

dụng: 26/02/2021; Sữa tươi DIELAC GROW

PLUS số lô: 0E72GPG15, ngày sản xuất:

28/6/2019, hạn sử dụng: 27/12/2019; Sữa tươi

DIELAC ALPHA GOLD số lô: 0D72GPG03,

ngày sản xuất: 28/6/2019, hạn sử dụng:

27/12/2019.

Dung môi pha mẫu: dung dịch đệm photphat

(pH=3): dung dịch axetonitril tỉ lệ 80:20 về thể

tích.

2.2. Quy trình phân tích

Hình 2. Phổ hấp thụ của vitamin B6

- Pha các dung dịch chuẩn vitamin B1, vitamin

B6 và vitamin B12.

- Khảo sát các điều kiện tối ưu của phương

phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để xác

định đồng thời vitamin B1, B6, B12.

- Xác định đồng thời vitamin B1, B6, B12

trong sữa bột và sữa tươi DIELAC GROW

PLUS và DIELAC ALPHA GOLD.

3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Tiến hành khảo sát cho thấy các điều kiện tối

ưu cho phép đo là: Detector DPA bước sóng

chọn lọc đối với vitamin: B1 (246 nm); vitamin

B6 (291 nm) và vitamin B12 (361 nm); Tốc độ

dòng chảy: 1,0 mL/phút; Pha động: kênh A:

dung dịch đệm photphat (pH=3) + kênh B:

dung dịch axetonitril tỉ lệ 80:20 về thể tích.

Tiến hành quét phổ hấp thụ của dung dịch chứa

các vitamin riêng rẽ B1, B6 và B12 từ bước

sóng 200 nm đến 400 nm. Các điều kiện khác

cố định không đổi gồm kênh A là dung dịch

đệm photphat, kênh B là axetonitril với tỉ lệ

80:20 về thể tích, tốc độ dòng là 1 mL/phút.

Phổ hấp thụ của viatmin B1, B6 và B12 thu

được ở hình 1, 2, 3; Sắc ký đồ của hỗn hợp 3

vitamin B1, B6 và B12 ở hình 4.

Hình 3. Phổ hấp thụ của vitamin B12

Hình 4. Sắc ký đồ của vitamin B1, B6 và B12

Khảo sát khoảng tuyến tính của vitamin B1,

B16 và B12 trong khoảng nồng độ từ 0,4

(ppm)-2,8 (ppm) trong điều kiện sắc ký đã

chọn ở trên. Xác định được sự phụ thuộc tuyến

tính giữa nồng độ và diện tích pic bằng phương

trình hồi quy tuyến tính và hệ số tương quan

R². Kết quả khảo sát độ tuyến tính của vitamin

B1, B16 và B12 được trình bày ở bảng 1.

Hình 1. Phổ hấp thụ của vitamin B1

205

Bảng 1. Kết quả khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính của vitamin B1, B6 và B12

Vitamin B1

Diện tích pic

Vitamin B6

Vitamin B12

Nồng độ

(ppm)

0,4

Nồng độ

Diện tích pic

(mAuxphút)

58998

Nồng độ

Diện tích pic

(mAuxphút)

9312

(mAuxphút)

69936

(ppm)

0,4

(ppm)

0,4

0,8

95585

0,8

80251

0,8

31498

1,2

117234

129059

140884

176358

211831

1,2

105503

1,2

56114

1,4

117129

1,4

67932

1,6

129755

1,6

76829

2,2

162364

2,2

116153

149576

2,8

2,6

198512

2,8

y = 58779x+47083

R²= 0,9998

y = 58276x + 35206

R²= 0,9996

y = 58860x - 14962

R²= 0,9993

Để xác định đồng thời các vitamin B1, B6 và

B12 trong sữa bột DIELAC GROW PLUS và

DIELAC ALPHA GOLD tiến hành như sau:

Cân chính xác 5,0000 gam sữa bột (hoặc hút

chính xác 15,0 mL sữa tươi) cho vào ống nhựa

ly tâm (50mL), hòa tan thành 25 mL bằng

dung môi pha mẫu. Lắc đều, rung siêu âm, sau

đó ly tâm gạn lấy dung dịch sau đó đem lọc

qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45

μm trước khi bơm vào hệ thống HPLC. Kết

quả phân tích của 4 lần lặp lại thu được kết quả

ở bảng 2.

Bảng 2. Kết quả xác định vitamin B1, B6, B12 trong sữa Dielac Grow Plus và Dielac Alpha Gold

Dielac Grow Plus

Dielac Alpha Gold

Mẫu

HLLT

HLXĐ

%RSD

HLLT

HLXĐ

%RSD

Sữa bột Dielac Grow Plus và Dielac Alpha Gold

Vitamin B1

Vitamin B6

Vitamin B12

2,200

0,004

2,247

2,252

1,25%

1,47%

1,260

1,500

0,003

1,266

1,537

1,03%

0,79%

Sữa tươi Dielac Grow Plus và Dielac Alpha Gold

Vitamin B1

Vitamin B6

Vitamin B12

0,468

0,668

0,004

0,478

0,666

2,09%

2,10%

0,668

1,200

0,004

0,677

1,256

2,07%

2,31%

Trong đó:

Nhận xét: Kết quả xác định vitamin B1, B6 và

B12 ở bảng 2 cho thấy hàm lượng vitamin B1,

B6 trong sữa bột và sữa tươi DIELAC GROW

PLUS và DIELAC ALPHA GOLD do nhà sản

xuất công bố và hàm lượng vitamin B1, B6 xác

định được khác nhau không đáng kể. Kết quả

trên cho thấy độ lệch chuẩn tương đối (%RSD)

của vitamin B1 và B6 trong sữa bột và sữa tươi

đều nhỏ hơn 2,31% . Riêng với vitamin B12

trong sữa có hàm lượng rất nhỏ dưới giới hạn

HLLT: là hàm lượng lý thuyết của vitamin B1,

B6 và B12 trong sữa bột và sữa tươi DIELAC

GROW PLUS và DIELAC ALPHA GOLD do

nhà sản xuất công bố (ppm)

HLXĐ: làm hàm lượng của vitamin B1, B6 và

B12 trong sữa bột DIELAC GROW PLUS và

DIELAC ALPHA GOLD xác định được

(ppm).

%RSD là độ lệch chuẩn tương đối của phép

xác định.

206

phát hiện của phương pháp do đó chúng tôi sử

dụng phương pháp thêm chuẩn để xác định.

Cân chính xác 5,0000 gam sữa bột (hoặc hút

chính xác 15,0 mL sữa tươi) cho vào ống nhựa

ly tâm (50mL); thêm lượng chất chuẩn vitamin

B1 (hoặc vitamin B6 hoặc vitamin B12 như

bảng 3), hòa tan thành 25 mL bằng dung môi

pha mẫu. Lắc đều, rung siêu âm, sau đó ly tâm

gạn lấy dung dịch sau đó đem lọc qua giấy lọc

và màng lọc có kích thước 0,45 μm trước khi

bơm vào hệ thống HPLC.

Bảng 3. Nồng độ vitamin B1, B6 và B12 chuẩn thêm vàosữa bột và sữa tươi

DIELAC GROW PLUS và DIELAC ALPHA GOLD

Mẫu

Nồng B1 0,800 1,600 2,000 2,800

độ

0,800 1,600 2,000 2,800

thêm

chuẩn

B12

0,800 1,600 2,000 2,800

Tiến hành chạy sắc ký các mẫu thêm chuẩn ở

điều kiện sắc ký đã chọn ở trên. Kết quả phân

tích của 4 lần lặp lại thu được kết quả ở bảng 4.

Nhận xét: Kết quả xác định vitamin B1, B6 và

B12 theo phương pháp thêm chuẩn ở bảng 4

cho thấy hàm lượng thêm chuẩn các vitamin

B1, B6 và B12 và hàm lượng xác định được

tương đối phù hợp, độ thu hồi của vitamin B1

từ 91,35% đến 100,81%, của vitamin B6 từ

90,44% đến 99,12% và của vitamin B12 từ

92,38% đến 100,68%. Điều đó chứng tỏ

phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân

tích sữa bột và sữa tươi DIELAC GROW

PLUS và DIELAC ALPHA GOLD trong thực

tế.

Bảng 4. Kết quả xác định độ thu hồi - Rev (%) của vitamin B1, B6 và B12 trong sữa bột và sữa tươi

DIELAC GROW PLUS và DIELAC ALPHA GOLD theo phương pháp thêm chuẩn

Mẫu

Sữa bột B1 91,35 92,86 99,77 100,81

Dielac

Grow

Plus

96,54 97,81 93,22 91,17

B12

97,38 98,25 92,85 93,21

Sữa bột B1 92,50 98,75 93,50 92,14

Dielac

Alpha

Gold

98,82 98,36 99,12 98,74

B12

97,75 98,06 92,75 96,50

Sữa tươi B1 98,52 95,65 95,14 92,75

Dielac

Grow

Plus

96,31 94,27 92,72 91,56

B12

92,38 98,94 97,05 94,64

Sữa tươi B1 97,25 91,54 98,65 93,18

Dielac

Alpha

Gold

97,71 98,38 91,22 90,44

B12

98,75 95,94 96,30 100,68

207

4. KẾT LUẬN

kỹ thuật hóa học, Trường Đại học Bách khoa

Hà Nội.

Đã khảo sát và lựa chọn được điều kiện tối ưu

cho phép xác định vitamin B1, B6 và B12 bằng

phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao; Các

kết quả xác định đồng thời vitamin B1, B6 và

B12 trong sữa bột và sữa tươi DIELAC

GROW PLUS và DIELAC ALPHA GOLD có

sai số đối với vitamin B1 (<2,09%), độ thu hồi

từ 91,35% đến 100,81%; sai số của phép xác

định vitamin B6 (<2,31%) và độ thu hồi từ

90,44% đến 99,12%; vitamin B12 có độ thu

hồi từ 92,38% đến 100,68%. Các kết quả xác

định cho thấy hàm lượng vitamin B1, B6 và

B12 trong sữa bột và sữa tươi DIELAC

GROW PLUS và DIELAC ALPHA GOLD

đáp ứng các tiêu chuẩn dược dụng Việt Nam

[3, 4, 5].

[2]. C. K. Markopoulou, K. A. Kagkadis, J. E.

Koundourelli (2002), An optimized method for

the simultaneous determination of vitamins B1,

B6, B12

in multivitamin tablets by

highperformance liquid chromatography,

Journal of Pharmaceutical and Biomedical

Analysis.

[3]. TCVN 5164:2008 (EN 14122:2003) Tiêu

chuẩn xác định Vitamin B1 bằng sắc ký lỏng

hiệu năng cao (HPLC).

[4]. TCVN 9513:2012 (EN 14663:2005) Tiêu

chuẩn xác định vitamin B6 bằng phương pháp

sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

[5]. TCVN 9514:2012 Tiêu chuẩn xác định

vitamin B12 bằng phương pháp sắc ký lỏng

hiệu năng cao (HPLC).

TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1]. Nguyễn Phi Hải (2016), Nghiên cứu xây

dựng quy trình định lượng 3 hoạt chất vitamin

B1, B6, B12 trong sản phẩm thuốc tiêm đông

khô Neutrivit 5000 bằng phương pháp sắc ký

lỏng hiệu năng cao (HPLC), Luận văn thạc sỹ

208

5 trang yennguyen 16/04/2022 1440

Download

Bạn đang xem tài liệu "Định lượng đồng thời vitamin B1, B6, B12 trong sữa bột và sữa tươi Dielac Grow Plus, Dielac Alpha Gold bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao", để tải tài liệu gốc về máy hãy click vào nút Download ở trên

File đính kèm:

dinh_luong_dong_thoi_vitamin_b1_b6_b12_trong_sua_bot_va_sua.pdf